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Elisa實驗:雙抗夾心法、間接法、競爭法優缺點對比
優點:
雙抗夾心法:高靈敏、高專一性,抗原無須事先純化,孵育2次,操作簡單,減少人為因素的影響,可靠的特異性。
間接法:二抗可以加強信號,而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它最多的免疫反應性。
競爭法:可適用比較不純的樣本,而且數據再現性很高。
競爭法 此法可用于抗原及半抗原的定量測定,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,將特異性抗體吸附于固相載體上,加入待測抗原和一定量的已知酶標抗原,使二者競爭地與固相抗體結合,經過洗滌分離,zui后結合于固相的酶標抗原與待測抗原含量呈負相關。
缺點:
雙抗夾心法:缺少鏈霉親和素的抗體,起不到型號放大作用,而且抗原一定得擁有兩個以上的抗體結合部位。
間接法:要經過三次孵育,操作步驟繁瑣,稍微不注意會導致操作誤差,交互反應發生的機率較高。間接法 此法是檢測抗體常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體上,加入待測血清(抗體)與之結合,洗滌后,加酶標抗體和底物進行測定。
競爭法:競爭法對于手法要求非常高,整體的敏感性和專一性都較差。
雙抗體夾心法測抗原:雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,適用于測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心。
雙抗原夾心法測抗體:反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物,以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋,可直接用于測定,因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關鍵在于酶標抗原的制備,應根據抗原結構的不同,尋找合適的標記方法。
間接法:是檢測抗體zui常用的方法,本法主要用于對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。
競爭法測抗體:當抗原材料中的干擾物質不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合??笻Be的檢測一般采用此法。
競爭法測抗原:小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的酶標抗原愈少,后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。
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